Typing of avian pathogenic Escherichia coli strains by REP-PCR

A técnica de REP (Repetitive extragenic palindrome)-PCR foi utilizada para avaliar a variabilidade genética de 49 amostras de Escherichia coli patogênicas para aves (APEC), isoladas de aves de corte (frangos) em diferentes surtos de septicemia (n=24), síndrome da cabeça inchada (n=14) e onfalite (n=11). Trinta amostras comensais, isoladas de frangos sem sinais de doença, foram utilizadas como controle. A análise do perfil eletroforético obtido por reação de REP-PCR utilizando DNA purificado das amostras evidenciou a amplificação de 0 a 15 bandas de DNA com pesos moleculares variando entre 100 pb e 6.1 Kb. A análise deste padrão permitiu a construção de um dendrograma demonstrando o agrupamento das 79 amostras em 49 perfis distintos. Embora a técnica de REP-PCR tenha apresentado grande poder discriminatório, as amostras patogênicas e não patogênicas não foram discriminadas entre si assim como não foi observado o agrupamento de amostras causadoras do mesmo tipo de doença. Por outro lado, demonstramos recentemente que outras técnicas tais como ERIC-PCR e a análise de isoenzimas foram eficientes quando utilizadas para esta mesma finalidade. Concluindo, REP-PCR parece não ser uma técnica eficiente e universal para discriminar entre amostras APEC. Porém, a estrutura clonal populacional obtida com o uso de REP-PCR não deve ser desprezada, particularmente se considerarmos que os mecanismos de patogenicidade de APEC ainda não são completamente conhecidos.

In the present study the repetitive extragenic palindromic (REP) polymerase chain reaction (PCR) technique was used to establish the clonal variability of 49 avian Escherichia coli (APEC) strains isolated from different outbreak cases of septicemia (n=24), swollen head syndrome (n=14) and omphalitis (n=11). Thirty commensal strains isolated from poultry with no signs of these illnesses were used as control strains. The purified DNA of these strains produced electrophoretic profiles ranging from 0 to 15 bands with molecular sizes varying from 100 bp to 6.1 kb, allowing the grouping of the 79 strains into a dendrogram containing 49 REP-types. Although REP-PCR showed good discriminating power it was not able to group the strains either into specific pathogenic classes or to differentiate between pathogenic and non-pathogenic strains. On the contrary, we recently demonstrated that other techniques such as ERIC-PCR and isoenzyme profiles are appropriate to discriminate between commensal and APEC strains and also to group these strains into specific pathogenic classes. In conclusion, REP-PCR seems to be a technique neither efficient nor universal for APEC strains discrimination. However, the population clonal structure obtained with the use of REP-PCR must not be ignored particularly if one takes into account that the APEC pathogenic mechanisms are not completely understood yet.

Sorotipagem de amostras de Streptococcus suis isoladas de suínos em granjas dos Estados de Säo Paulo, Minas Gerais e Paraná / Serotyping of Streptococcus suis strains isolated from pigs in the States of Säo Paulo, Minas Gerais e Paraná, Brazil

Infecçöes causadas por Streptococcus suis säo muito comuns em países onde a indústria de carne suína é desenvolvida. Estas infecçöes estäo relacionadas a casos clínicos de broncopneumonia, meningite, artrite, pericardite, miocardite, endocardite, poliserosite fibrinosa, septicemia, rinite e aborto. Esta bactéria também foi descrita como patógeno de ruminantes e humanos. No Brasil há evidências clínicas da existência de processos infecciosos causados por S. suis afetando mais de 50 por cento das granjas em Estados como Säo Paulo, Minas Gerais e Paraná. No presente estudo foram isoladas 51 amostras de S. suis de granjas do Estados acima referidos, coletadas de diferentes casos clínicos como septicemia, meningite, artrite e pneumonia, tendo sido obtidas ou em cultura pura ou como patógeno de maior predominância nos tecidos de suínos. Este material foi semeado em Columbia ágar sangue adicionado de 5 por cento de sangue bovino e incubado a 37°C por 24 horas. Para a identificaçäo bioquímica as colônias que apresentavam a-hemólise, bem como as amostras padräo, foram submetidas a testes convencionais para a confirmaçäo da espécie S. suis, tais como: hidrólise de arginina, teste de Voges-Proskauer, e produçäo de ácido a partir de vários carboidratos (inulina, salicina, trealose, lactose, sacarose, sorbitol, manitol e glicerol). As amostras também foram testadas para habilidade de crescimento em meio de TSA com 6,5 por cento de NaCl e para a produçäo de amilase. Todas as amostras que fizeram parte desta pesquisa foram testadas pelo sistema Api 20 Strep para confirmaçäo dos resultados obtidos nos testes convencionais. Para a sorotipagem foram produzidos antissoros de 1 a 8. Outras amostras näo pertencentes a estes sorotipos também foram sorotipadas. O antissoro produzido em coelhos foi titulado pelo teste de aglutinaçäo em tubo com 2-mercaptoetanol e pelo teste de reaçäo capsular e, quando adequados, foram usados no teste de co-aglutinaçäo, para a sorotipagem das amostras de S. suis. A sorotipagem das 51 amostras isoladas mostraram os seguintes resultados: 30 (58,8 por cento) foram classificadas como sorotipo 2, 11 (21,6 por cento) das amostras como sorotipo 3, sete (13,72 por cento) como sorotipo 7, duas (3,92 por cento) como sorotipo 1 e uma amostra como pertencente ao sorotipo14 (1,96 por cento). Este é o primeiro relato do isolamento de um grande número de amostras de S. suis no Brasil, de casos típicos de processos infecciosos causados por esta bactéria

Use of an indirect haemagglutination test, for the detection of Clostridium perfringens type A enterotoxin

An indirect haemagglutination (IH) test is described for the detection of Clostridium perfringens type A enterotoxin, produced by strains isolated from human cases of food poisoning and from contaminated food. Though no strict relationship could be observed between titers in the IH test and the time it took mice to die from the intravenous inoculation of mice (IIM), results of the supernatants examined by both methods demonstrated that the IH test was more sensitive than the ILM one. No unspecific reaction was obtanined int he IH wirh a negative control and the inhibitions of the IH and IIM tests by specific antiserum against C. perfringens enterotoxin showed that the IH test is very spcific. The IH assay is recommended for its sensitivity and easy performance by less-equipped laboratories, by these and other data

Reproduçäo experimental da colibacilose suína em leitöes / Experimental reproduction of colibacillosis in piglets

Foi tentada a reproduçäo experimental da colibacilose suína neonatal, em leitöes recém-nascidos, usando-se para tal 4 grupos de amostras de Escherichia coli enterotoxigênicas (ETEC), a saber: 1) Duas amostras do sorogrupo 0149:K81, produtoras da enterotoxina termolábil (LT) e do fator de colonizaçäo K88; 2) Duas amostras do sorogrupo 0101:K30, produtoras da enterotoxina termoestável (STa) e do fator de colonizaçäo K99; 3) Uma amostra do sorogrupo 0157:K?, produtora da enterotoxina termoestável do tipo STb e do fator de colonizaçäo K88, e 4) Uma amostra do sorogrupo 08:K?, produtora da enterotoxina termoestável(STa) e de um novo fator de colonizaçäo, denominado F42. Todos os 14 leitöes inoculados por via oral com estas amostras de ETEC desenvolveram doença clínica com morte até 42 horas após a inoculaçäo, tendo sido possível detectar em todos eles a colonizaçäo do intestino delgado pelas amostras do ETEC inoculadas, através de técnica de imunofluorescência indireta. A produçäo de STa "in vivo", por amostras dos grupos 2 e 4 foi um fator importante na comprovaçäo de que a reproduçäo experimental da doença por estas amostras realmente ocorreu. De fato, a coprocultura, quer das fezes diarréicas, quer do conteúdo intestinal dos animais, revelou um alto índice de recuperaçäo de colônias LT+ -K88+ e Sta+ -K99+. Embora tenham ocorrido entre os diversos materiais examinados algumas diferenças quantitativas, a recuperaçäo de colônias STa+ -F42+ foi menor do que nos casos anteriores, porém os achados referentes a doença clínica, produçäo de STa "in vivo" e colonizaçäo do intestino delgado dos leitöes inoculados, comprovaram que o antígeno F42 é, sem dúvida, um novo fator de colonizaçäo em amostras de ETEC envolvidas na colibacilose suína

Incidência de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC), rotavírus e Clostridium perfringens de casos de diarréia em crianças, na regiäo de Campinas, SP, Brasil / Incidence of enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) rotaviruses and clostridium perfringens from cases of infantile diarrhea, in the region of Campinas, SP, Brazil

Foi realizada uma pesquisa na regiäo de Campinas, S-, Brasil, sobre a presença de Escherichia coli enterotoxigência (ETEC), rotavírus e clostridium perfringens enterotoxigênico em fezes diarréicas de crianças com até 2 anos de idade. Dos 132 especimes fecais examinados quanto a presença de ETEC 27 (20,45%) foram positivos. Destes foram isoladas 41 amostras de ETEC, das quais 40 produziram apenas a enterotoxina termolábil (LT) detectada pelo teste de imuno-hemólise radial modificado. Entre as 1983 amostras de fezes examinadas para rotavírus, 29 (15,84%) foram positivas pelas técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) e ensaio imunoenzimático (EIE), sendo que destas, 15 (51,7%) foram provenientes de materiais coletados nos meses de inverno. Todas as amostras pertenciam ao grupo A e, através da técnica de PAGE, pode-se observar que o tipo eletroforético mais freqüente (9 amostras) foi designado Ib, IIc, IIIb, IVa, de acordo com a classificaçäo por nós adotada. Apenas 113 amostras de fezes foram examinadas para a presença de C. perfringens enterotoxigênico. Para a detecçäo da enterotoxina nos sobrenadantes das culturas foram utilizadas as técnicas de hemaglutinaçäo passiva reversa e inoculaçäo intravenosa em camundongos, sendo encontradas 12(10,62%) amostras enterotoxigências. Diante destes resultados é chamada a atençäo sobre o valor apenas relativo de uma coprocultura convencional para fins de diagnóstico, ressaltando-se a importância da criaçäo de métodos simplificados que favoreçam a detecçäo e identificaçäo dos grupos de agentes enteropatogênicos estudados na presente pesquisa